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淺談動態(tài)觀察柴胡皂苷a對實(shí)驗(yàn)性癲癇小鼠癇性發(fā)作的影響
【關(guān)鍵詞】 柴胡皂苷
摘要:目的 研究柴胡皂苷a(saikosaponin a,SSa)對戊四氮（PTZ）誘導(dǎo)的小鼠癇性發(fā)作的影響，了解其藥效特點(diǎn)。 方法 采用PTZ誘導(dǎo)小鼠急性癇性發(fā)作來制作癲癇模型，通過記錄不同時間點(diǎn)小鼠癇性發(fā)作潛伏期和強(qiáng)直性驚厥率的變化，研究SSa抗小鼠PTZ致癇作用的動態(tài)特征。結(jié)果 SSa 腹腔注射30、60、90 min組能顯著延長陣發(fā)性痙攣潛伏期（P0.05），其中SSa 90 min組作用最為顯著（P001）。在60、90、120 min組中，SSa 腹腔注射也能明顯延長強(qiáng)直性驚厥潛伏期（P0.05），其中尤以90 min組作用顯著(P001); SSa 90 min組對過渡時間延長作用顯著（P0.05）；SSa 30 min、60 min組能減少PTZ致癇小鼠強(qiáng)直性驚厥發(fā)作例數(shù)（P005），且以SSa 60 min組作用最為顯著。結(jié)論 SSa具有對抗小鼠PTZ致癇作用；腹腔注射SSa對PTZ誘導(dǎo)小鼠的癇性發(fā)作在120 min內(nèi)以60 min、90 min藥效作用較強(qiáng)。
關(guān)鍵詞:實(shí)驗(yàn)性癲癇;柴胡皂苷 a; PTZ;小鼠
Abstract: Objective To study the dynamic variations of the effect of saikosaponin a (SSa) on epileptic mice induced by pentylenetetrazol（PTZ）,and to understand the effect characteristics of SSa. Method With the epileptic mice induced by PTZ as animal model. In the different time point,the tentative seizure incubation period and the case of tetanic convulsion were recorded to study the characteristics of the antiepileptic effect of SSa on mouse induced by PTZ. Results In the group of 30min,60 min and 90 min,the incubation period of clonic cramp was significantly prolonged by SSa (P0.05),and in the group of 90 min,the effect was remarkable (P0.01). Also,intraperitoneal injection of SSa could prolong the incubation period of tetanic convulsion in the group of 60 min,90 min and 120 min (P0.05).The effect was especially evident in the group of 90 min (P0.01). In the group of 90 min,the transition time was remarkably prolonged by SSa (P0.05). In the group of SSa 30 min and SSa 60 min,SSa could reduce the tetanic convulsion of epileptic mice introduced by PTZ (P0.05),and the effect is more significant in the group of 60min than that in the group of 30min. In the group of 30 min and 60 min,SSa could protect the epileptic mice introduced by PTZ from tetanic convulsion more significantly than those in the group of 90 min and 120 min.Conclusions SSa can inhibit the epileptic mice induced by PTZ,SSa can protect the mouse from tetanic convulsion,and in 2 hours,the effect was more remarkable at 60th min,90th min than others.
Key words: epilepsy; Saikosaponin a; PTZ; mice
柴胡皂苷（saikosaponin）為中藥柴胡的主要成分之一，其單體成分之一的柴胡皂苷a(SSa)有降血脂、抗?jié)B出、抗肉芽腫和保護(hù)肝細(xì)胞等作用［1］，對于慢性腎病的治療也有較好療效［2，3］，但目前尚沒有SSa抗癲癇作用的報(bào)道。不過已有不少證據(jù)表明柴胡及柴胡總皂苷具有鎮(zhèn)靜和抗實(shí)驗(yàn)性癲癇的作用［4，5］。在柴胡皂苷單體各成分中，為明確何種皂苷單體具有抗癲癇作用，筆者研究了SSa對PTZ致癇小鼠癇性發(fā)作的影響，并探討SSa對癇性發(fā)作影響的不同時間的動態(tài)變化，以期了解SSa抗癲癇藥效作用的時間特點(diǎn)。
1 材 料
1.1 動物
健康昆明種小鼠180只，雌雄各半，體質(zhì)量（20±2）g,由南方醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號為2004A063。
1.2 主要試劑
柴胡皂苷a購自上海醫(yī)藥工業(yè)研究所，批號050106；丙戊酸鈉（VPA）注射劑（德巴金）由杭州賽諾菲圣德拉保民生制藥有限公司生產(chǎn)，批號0402049。 戊四氮由美國Sigma公司生產(chǎn)，批號064k0686。
2 實(shí)驗(yàn)方法 1 實(shí)驗(yàn)動物分組
將180只昆明小鼠隨機(jī)分為9 組，每組20只，雌雄各半。A組:生理鹽水組（生理鹽水+ PTZ致癇），作為以下各組的對照組；B、C、D、E組分別為經(jīng)SSa預(yù)處理30、60、90、120 min組（SSa 30 min、SSa 60 min、SSa 90 min、SSa 120 min + PTZ致癇）；F、G、H、I組分別為經(jīng)VPA預(yù)處理30、60、90、120 min組(VPA 30 min、VPA60 min、VPA90 min、VPA120 min + PTZ致癇)。 2 模型制備及給藥方法
A組小鼠在腹腔內(nèi)注射生理鹽水（10 mL/kg）后30 min時腹腔注射PTZ（85 mg/kg）致癇；B、C、D、E組小鼠分別在腹腔注射SSa（7.24 mg/kg）后30、60、90、120 min時腹腔注射上述劑量的PTZ致癇；F、G、H、I組小鼠分別在腹腔注射VPA (200 mg/kg)后30、60、90、120 min時腹腔注射上述劑量的PTZ致癇。 3 觀察指標(biāo)
小鼠癇性發(fā)作分級采用Racine標(biāo)準(zhǔn)［4］。0級：無發(fā)作反應(yīng)；1級：節(jié)律性口角、耳或面部肌肉抽動陣攣；2級：點(diǎn)頭并伴隨更嚴(yán)重的面部肌肉抽動陣攣；3級: 出現(xiàn)前肢陣攣但不伴隨直立；4級：前肢陣攣伴隨直立；5級：全身強(qiáng)直陣攣發(fā)作而跌倒。腹腔注射PTZ后立即觀察小鼠的行為動作，連續(xù)10 min，記錄小鼠癇性發(fā)作潛伏期，包括陣發(fā)性痙攣潛伏期（即從注射PTZ開始至相當(dāng)于1~3級發(fā)作的時間）、強(qiáng)直性驚厥潛伏期（即從注射PTZ開始至相當(dāng)于5級發(fā)作的時間），計(jì)算由陣發(fā)性痙攣向強(qiáng)直性驚厥發(fā)作的過渡時間；并記錄發(fā)生強(qiáng)直性驚厥的例數(shù)，計(jì)算其發(fā)作率。 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
應(yīng)用SPSS10.0軟件，多樣本均數(shù)的比較采用方差分析，計(jì)數(shù)資料及率的比較用卡方檢驗(yàn)，以P005為差異有顯著性。 3 結(jié) 果 1 SSa對PTZ致癇小鼠癇性發(fā)作潛伏期的動態(tài)影響
將對應(yīng)時間點(diǎn)SSa預(yù)處理、VPA預(yù)處理組與生理鹽水組比較，B、C、D、F、G、H各組陣發(fā)性痙攣潛伏期明顯延長，與A組比較差異有顯著性（P0.05），其中尤以D、F、G組差異顯著（P0.01）；C、D、E、F、H組強(qiáng)直性驚厥潛伏期同樣延長，與A組比較差異有顯著性（P0.05），其中尤以D、F組差異顯著(P001)；在過渡時間的比較中，D、F組與A組比較差異均有顯著性（P0.05），其中尤以F組差異顯著(P0.01)。將對應(yīng)時間點(diǎn)的SSa組與VPA組比較，30 min時 SSa組對各潛伏期的延長作用不如VPA組(P001)，其余各時間點(diǎn)比較差異無顯著性。見表1。以上結(jié)果提示，SSa不僅能明顯延長陣發(fā)性痙攣潛伏期，而且能夠顯著延長強(qiáng)直性驚厥潛伏期及其過渡時間，其作用在60 min、90 min時強(qiáng)于30 min、120 min時，而VPA的作用以30 min和60 min強(qiáng)于90 min與120 min，可見SSa達(dá)到最佳作用的時間比VPA延后。表1 SSa對PTZ致癇小鼠癇性發(fā)作潛伏期的動態(tài)影響（略） 2 SSa對PTZ致癇小鼠強(qiáng)直性驚厥發(fā)作例數(shù)的動態(tài)影響
根據(jù)小鼠10 min內(nèi)在PTZ誘導(dǎo)下出現(xiàn)強(qiáng)直性驚厥的例數(shù)，將對應(yīng)時間點(diǎn)SSa預(yù)處理組、VPA預(yù)處理組與生理鹽水組比較，SSa與VPA預(yù)處理30 min、60 min組出現(xiàn)強(qiáng)直性驚厥例數(shù)與生理鹽水組比較差異有顯著性，其作用優(yōu)于90 min、120 min組。見表2。表2 SSa對PTZ致癇小鼠強(qiáng)直性驚厥發(fā)作例數(shù)的動態(tài)影響（略）
4 討 論
PTZ為很強(qiáng)的致癇劑，其致癇模型被認(rèn)為是理想的全身強(qiáng)直性驚厥發(fā)作模型之一,PTZ本身無特殊的神經(jīng)毒性作用［6］,所以被廣泛應(yīng)用于癲癇發(fā)病機(jī)理的研究、抗癲癇藥物的篩選。當(dāng)PTZ誘發(fā)小鼠癲癇發(fā)生時，其癇性發(fā)作的特點(diǎn)是初期以陣攣性發(fā)作為主，很快以全身強(qiáng)直性驚厥發(fā)作為主要特點(diǎn)，根據(jù)其發(fā)作特點(diǎn)，在本研究中以這2種發(fā)作形式為指標(biāo)并結(jié)合目前公認(rèn)的Racine標(biāo)準(zhǔn)來分析其癇性行為。
VPA是臨床常用抗癲癇的主要藥物之一，有廣譜抗癲癇作用，對單純失神發(fā)作及全身強(qiáng)直陣攣(驚厥)發(fā)作療效最好，對單純及復(fù)雜部分性發(fā)作、肌陣攣性發(fā)作等也有良效。有文獻(xiàn)研究VPA在大鼠血清和腦脊液濃度變化時發(fā)現(xiàn)，腦脊液內(nèi)最高藥物濃度低于血清濃度，且其達(dá)到最高藥物濃度時間遲于血清藥物最高濃度，其半衰期約為60 min［7］。本研究也證實(shí)VPA既能延長陣發(fā)性痙攣、強(qiáng)直性驚厥的潛伏期，也能抑制強(qiáng)直性驚厥發(fā)作率，明顯減少驚厥發(fā)生例數(shù)，其作用以30 min和60 min時尤為明顯，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。本研究結(jié)果顯示，SSa不僅能明顯延長小鼠陣發(fā)性痙攣的潛伏期，而且能夠顯著延長強(qiáng)直性驚厥的潛伏期及其過渡時間，能明顯減少小鼠發(fā)生強(qiáng)直性驚厥的例數(shù)，抑制驚厥發(fā)作率，其作用在60 min、90 min時較強(qiáng)。提示SSa具有較好的抗實(shí)驗(yàn)性癲癇作用，可能對肌陣攣性發(fā)作、全身強(qiáng)直陣攣發(fā)作有效。就本研究給出的劑量而言，30 min時 SSa對小鼠各潛伏期的延長作用不如VPA，但隨著時間的延長，SSa在60 min、90 min時對潛伏期的延長明顯，可能與SSa的起效作用較慢有關(guān)。至于SSa的代謝特點(diǎn)，有研究顯示其口服代謝時與消化道的菌群有密切關(guān)系［8］，其代謝呈現(xiàn)時間依賴性，早期有學(xué)者將其在體外胃液及腸道細(xì)菌共同培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)SSa在3 h內(nèi)完全被代謝，而轉(zhuǎn)化為其他類型的皂苷或苷元［9］。
但SSa在血清及腦脊液中的變化情況如何，其代謝與藥效作用是否相關(guān)，以及SSa能否在更長的時間內(nèi)維持其作用，還有待進(jìn)一步研究。
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