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注射用頭孢西丁鈉含量測定方法的改進
注射用頭孢西丁鈉含量測定方法的改進【摘要】 目的 采用離子對色譜法測定注射用頭孢西丁鈉的含量，為完善注射用頭孢西丁鈉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。方法 采用離子對色譜法，色譜柱為Agilent ZORBAX 80A Extend C18柱（150 mm×4.6 mm,5μm ）；流動相為5 mmol·L-1氫氧化四丁基銨溶液?乙腈（體積比750∶250）；檢測波長254 nm;流速為1 mL·min-1.結(jié)果 頭孢西丁的質(zhì)量在0.310 1——3.101 0 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r=0.999 98;平均回收率為100.2%,RSD為1.05%.結(jié)論 本文方法簡單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，為完善注射用頭孢西丁鈉含量測定方法提供了依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】 頭孢西丁鈉；離子對色譜法；含量測定
Abstract:Objective To develop an HPLC method for determining the content of cefoxitin sodium in the injections.Methods Cefoxitin sodium was analyzed on an Agilent ZORBAX 80A Extend C18 colum （150 mm×4.6 mm,5 μm） . The mobile phase consisted of 5 mmol.L-1 tetrabutylammonium hydroxide?acetonitrile（750∶250）。 The flow rate was 1.0 mL·min-1 and the detection wavelength 254 nm.Results Cefoxitin sodium has a good linearity in the range of 0.3101-3.1010 μg（r=0.999 98） with an average recovery of 100.2%（RSD 1.05%）。Conclusion This method is simple, accurate and reproducible for the quality control of cefoxitin sodium injection.
Key words:cefoxitin sodiumn; HPLC; content determination
頭孢西丁為β?內(nèi)酰胺類抗生素，由美國默沙東公司開發(fā)并于1974年上市。頭孢西丁抗菌作用和抗菌譜同第二代頭孢菌素，但對厭氧菌特別是脆弱擬桿菌的作用更強，對β?內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定。臨床上用于腹膜炎和其他腹腔內(nèi)、盆腔內(nèi)、婦科感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎、尿路感染（包括淋�。�、呼吸道感染、骨關(guān)節(jié)軟組織感染。采用注射用頭孢西丁鈉的國家標(biāo)準(zhǔn)[1,2]及相關(guān)文獻[3,4]方法測定頭孢西丁的含量，結(jié)果頭孢西丁的理論塔板數(shù)較低，色譜峰拖尾較嚴重。本文采用離子對色譜（IPC）法測定頭孢西丁的含量，能較大程度地提高頭孢西丁的理論塔板數(shù)，改善色譜峰拖尾現(xiàn)象，且操作簡便易行，結(jié)果重現(xiàn)性好，專屬性強。
1 儀器與試藥
島津LC2010A/C型高效液相色譜儀，Class?VP色譜工作站，METTLER TOLEDO十萬分之一電子天平。
乙腈為色譜純，實驗用水為超純水，磷酸、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、10%四丁基氫氧化銨溶液為分析純。頭孢西丁對照品（批號130572?200701,質(zhì)量分數(shù)為95.3%,供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所），注射用頭孢西丁鈉（康田制藥（中山）有限公司，批號0711011、0711012、0711013）。
2 測定方法的建立
2.1 色譜條件
色譜柱：Agilent ZORBAX 80A Extend?C18柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）；流動相：5 mmol·L-1氫氧化四丁基銨溶液（取10%四丁基氫氧化銨溶液13.2 mL,加水900 mL后，用1 mol·L-1磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0,再用水稀釋至1 000 mL）?乙腈（體積比750∶250）；檢測波長254 nm;流速為1 mL·min-1;進樣量5 μL.在此條件下供試品和對照品的高效液相色譜圖見圖1、圖2.
2.2 供試品溶液的制備[1,2]
取本品內(nèi)容物，精密稱取適量（約相當(dāng)于頭孢西丁15 mg）置50 mL量瓶中，用磷酸鹽緩沖液（稱取磷酸二氫鉀1.0 g和磷酸氫二鈉1.8 g,加水900 mL使溶解，用磷酸或10 mol·L-1氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.0,再用水稀釋至1 000 mL,搖勻）溶解并稀釋至刻度，制成每1 mL中約含頭孢西丁0.3 mg的溶液，作為供試品溶液。
2.3 對照品儲備液的制備
取頭孢西丁對照品適量，精密稱定，加磷酸鹽緩沖液制成0.6 mg·mL-1的對照品儲備液。
2.4 線性關(guān)系
分別精密量取質(zhì)量濃度為0.620 2 mg·mL-1頭孢西丁對照品儲備液1、2、5、6、8 mL,加磷酸鹽緩沖液稀釋成質(zhì)量濃度為0.062 02——0.620 2 mg·mL-1的對照品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進行測定。以質(zhì)量（m）為橫坐標(biāo)，各自峰面積（A）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為
A=1.277×106m+9.774×103,r=0.999 9（n=6）
結(jié)果表明頭孢西丁的質(zhì)量在0.310 1——3.101 0 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
2.5 精密度試驗
取質(zhì)量濃度為0.3 mg·mL-1的對照品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進行測定，重復(fù)進樣5次，測得頭孢西丁峰面積的RSD為0.57%,表明試驗精密度良好。
2.6 穩(wěn)定性試驗
取同一批號供試品溶液于0、1、2、3、4、5、6 h內(nèi)按“2.1”項下的色譜條件進行測定，測得頭孢西丁峰面積的RSD為0.98%,表明供試品溶液在6 h內(nèi)基本穩(wěn)定。
2.7 重復(fù)性試驗
取同一批號樣品，分別按“2.2”項下的方法平行制備6份供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進行測定，頭孢西丁的平均含量為94.26%,RSD為0.29%,表明方法重復(fù)性良好。
2.8 回收率試驗
精密稱取已知含量的樣品5份，按“2.2”項下的方法制成每1 mL中約含頭孢西丁1 mg的供試品溶液，分別精密吸取3 mL供試品溶液置5個20 mL的容量瓶中，再分別精密加入已知濃度的對照品溶液10 mL,加磷酸鹽緩沖液溶解并稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件進行測定，結(jié)果頭孢西丁的平均回收率為100.4%,RSD為1.05%.見表1.表1 頭孢西丁加樣回收率試驗
2.9 樣品測定
取3批樣品，按“2.2”項下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進行測定，以外標(biāo)法計算頭孢西丁的含量。結(jié)果3批樣品中頭孢西丁的平均百分含量分別為94.43%,94.71%,93.59%.
3 討 論
3.1 檢測波長的選擇
參照注射用頭孢西丁鈉的國家標(biāo)準(zhǔn)[1,2],選擇254 nm為檢測波長。
3.2 流動相中氫氧化四丁基銨濃度的選擇[5]
以水?乙腈（體積比750∶250）為流動相，分別考察流動相中氫氧化四丁基銨濃度依次為0 、2.5、5、10及20 mmol·L-1時對頭孢西丁色譜行為的影響。結(jié)果表明，當(dāng)流動相中氫氧化四丁基銨濃度為5 mmol·L-1時，頭孢西丁的理論塔板數(shù)和拖尾因子最理想，故氫氧化四丁基銨濃度采用5 mmol·L-1.
3.3 流動相的pH值選擇
以5 mmol·L-1氫氧化四丁基銨溶液?乙腈（體積比750∶250）為流動相，改變其pH值，考察pH值對頭孢西丁的色譜行為的影響。結(jié)果表明，在pH 4.0時頭孢西丁峰的理論塔板數(shù)最大及拖尾因子最小，故流動相的pH值選擇4.0.
3.4 方法耐用性考察
分別對不同廠牌型號的色譜柱進行考察，并與國家藥品標(biāo)準(zhǔn)的色譜條件進行比較，結(jié)果見表2.由表2可見，采用國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[1,2]的流動相試驗達不到國家標(biāo)準(zhǔn)[1]所規(guī)定的要求（理論塔板數(shù)按頭孢西丁峰計算應(yīng)不低于2 800,拖尾因子應(yīng)不大于1.5）；只有使用新的色譜柱才能達到要求；用改進后的方法測定，使用不同的色譜柱和不同的高效液相色譜儀均能達到國家標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，表明本文方法耐用性、重現(xiàn)性良好。表2 方法耐用性考察注：編號1-6采用島津LC2010A/C型高效液相色譜儀；編號7-8采用Agilent LC1100高效液相色譜儀
【參考文獻】
[1] 國家食品藥品監(jiān)督管理局。YBH14042005國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].
[2] 國家食品藥品監(jiān)督管理局。YBH17442006國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].
[3] 王秀萍，費瀚雨，儲潼。HPLC法測定注射用頭孢西丁鈉的含量[J].中國藥師，2007（01）：46-47.
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